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5×SDS-PAGE
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Buffer配制方法
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loading buffer 的中文名字叫上样缓冲液,6*的缓冲液中可以显示两条带,前面的蓝色的条带是溴酚蓝,代表的片段大小是 300bp,后面的有点绿色的条带是二甲苯青,代表的片段大小在4000bp左右。 loading buffer的功能主要有两个。第一,里边的指示剂溴酚蓝和二甲苯酚起到指示的作用,显示电泳的进程,以便我们适时终止电泳;第二,里边的成分甘油可以加大样品密度,使样品密度大于TAE,从而沉降到点样孔中,防止样品飘出点样孔。另外,有的Buffer是加有SDS的,一般都会写明。SDS主要是促使聚合酶变性,因为没有除尽的聚合酶会结合在DNA双链上影响它的迁移速率。细胞裂解后的裂解液,加loading 100℃加热,也是为了中止酶促反应,防止提取的蛋白质降解。
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